核酸分子雜交技術(shù)

第一章核酸的分子結(jié)構(gòu)與分子雜交的基本原理1
第一節(jié)發(fā)現(xiàn)核酸1
第二節(jié)核酸的分子結(jié)構(gòu)5
一、核苷酸的結(jié)構(gòu)5
二、DNA的分子結(jié)構(gòu)9
三、RNA的分子結(jié)構(gòu)18
第三節(jié)核酸分子雜交的基本原理及在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用21
一、DNA的變性23
二、DNA的復(fù)性 25
三、核酸雜交在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用簡介27
參考文獻(xiàn)27
第二章核酸分子雜交的類型28
第一節(jié)固相核酸分子雜交類型28
一、菌落原位雜交（colony in situ hybridization）28
二、斑點雜交（dot blot）29
三、Southern印跡雜交（Southern blot）30
四、Northern印跡雜交（Northern blot）31
五、組織原位雜交（tissue in situ hybridization）32
六、固相夾心雜交35
七、其他固相雜交類型35
八、固相核酸雜交的幾點說明36
第二節(jié)液相核酸分子雜交類型36
一、吸附雜交36
二、發(fā)光液相雜交37
三、液相夾心雜交37
四、復(fù)性速率液相分子雜交38
參考文獻(xiàn)38
第三章核酸探針的種類、標(biāo)記及檢測39
第一節(jié)核酸探針的種類40
一、DNA探針40
二、cDNA探針41
三、RNA探針41
四、寡核苷酸探針42
第二節(jié)核酸探針的標(biāo)記和檢測43
一、放射性同位素核酸探針的標(biāo)記和檢測44
二、非放射性核酸探針的標(biāo)記和檢測47
參考文獻(xiàn)49
第四章核酸分子雜交實驗因素的優(yōu)化50
一、探針的選擇50
二、探針的標(biāo)記方法51
三、探針的濃度51
四、雜交率52
五、雜交最適溫度52
六、雜交的嚴(yán)格性53
七、雜交反應(yīng)時間54
八、雜交促進(jìn)劑55
參考文獻(xiàn)55
第五章斑點雜交56
一、概述56
二、雜交方法57
三、斑點雜交的應(yīng)用61
參考文獻(xiàn)63
第六章Southern印跡雜交64
第一節(jié)Southern印跡雜交的基本原理64
一、DNA從凝膠到膜上的轉(zhuǎn)移方法64
二、Southern雜交膜67
三、核酸探針的標(biāo)記68
第二節(jié)Southern印跡法的基本過程70
一、DNA樣品的酶切和電泳70
二、準(zhǔn)備用于轉(zhuǎn)移的凝膠72
三、DNA從瓊脂糖凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物73
四、探針標(biāo)記74
五、雜交75
六、洗膜77
七、雜交結(jié)果的檢測77
八、雜交膜的重復(fù)使用78
九、注意事項78
十、雜交嚴(yán)謹(jǐn)性80
第三節(jié)Southern雜交的應(yīng)用進(jìn)展81
參考文獻(xiàn)85
第七章Northern印跡雜交86
第一節(jié)Northern印跡雜交的基本原理86
第二節(jié)雜交方法88
一、 RNA電泳88
二、將變性RNA轉(zhuǎn)移至尼龍膜92
三、雜交和結(jié)果檢測96
四、雜交結(jié)果的分析100
第三節(jié)Northern雜交的應(yīng)用與進(jìn)展101
一、反向Northern雜交和Northern雜交篩選mRNA表達(dá)101
二、高通量反向Northern印跡雜交和Northern雜交102
參考文獻(xiàn)105
第八章原位雜交106
第一節(jié)原位雜交組織化學(xué)技術(shù)的由來及發(fā)展106
第二節(jié)原位雜交技術(shù)的基本方法108
一、玻片準(zhǔn)備和組織固定109
二、樣品的預(yù)處理110
三、預(yù)雜交110
四、雜交111
五、雜交后的清洗112
六、免疫學(xué)檢測112
七、觀察結(jié)果115
第三節(jié)原位雜交的影響因素116
一、影響雜交的主要因素116
二、影響雜交的其他因素118
第四節(jié)探針標(biāo)記120
一、探針標(biāo)記的直接法和間接法120
二、半抗原標(biāo)記120
三、標(biāo)記方法124
四、地高辛、生物素或熒光染料標(biāo)記探針125
第五節(jié)熒光原位雜交137
一、FISH技術(shù)的發(fā)展史138
二、FISH技術(shù)操作140
三、FISH的應(yīng)用146
四、FISH技術(shù)的進(jìn)展149
參考文獻(xiàn)153
第九章菌落原位雜交154
一、小量細(xì)菌克隆的原位雜交篩選155
二、中等量細(xì)菌克隆的原位雜交篩選菌落155
三、大量細(xì)菌克隆的原位雜交篩選157
四、菌落的裂解及DNA結(jié)合于濾膜 158
五、與菌落的影印濾膜進(jìn)行雜交 159
參考文獻(xiàn)160
第十章DNA芯片技術(shù)162
第一節(jié)生物芯片與DNA芯片162
一、生物芯片與DNA芯片的概念163
二、DNA芯片的主要類型164
第二節(jié)DNA芯片技術(shù)的基本原理與方法165
一、芯片的制備165
二、樣品的準(zhǔn)備169
三、分子雜交169
四、檢測分析171
第三節(jié)DNA芯片技術(shù)的應(yīng)用概況171
一、DNA序列分析172
二、基因突變檢測173
三、基因表達(dá)譜分析174
四、基因組研究174
五、基因診斷176
六、藥物研究與開發(fā)176
七、其他領(lǐng)域177
參考文獻(xiàn)177
常用緩沖溶液的配制178