基于TLRs信號通路的調(diào)衡防控分子機制研究

部分預針刺不同配穴對SGU大鼠模型胃組織的影響
1預針刺不同配穴對SGU大鼠胃黏膜的形態(tài)學影響2
1.1實驗材料2
1.1.1實驗動物及分組2
1.1.2主要儀器及試劑2
1.2實驗方法3
1.2.1實驗動物分組及干預方法3
1.2.2造模方法4
1.2.3觀察指標及檢測方法5
1.2.4統(tǒng)計分析6
1.3實驗結(jié)果7
1.3.1各組大鼠胃組織大體形態(tài)比較7
1.3.2各組大鼠胃潰瘍組織形態(tài)學比較7
1.4小結(jié)8
1.5討論9
1.5.1胃潰瘍的現(xiàn)代及中醫(yī)的認識9
1.5.2水浸束縛應激性胃潰瘍動物模型的發(fā)展變化24
1.5.3論合募配穴和俞募配穴25
1.5.4合募配穴和俞募配穴防治應激性胃潰瘍的效應
規(guī)律分析26
2預針刺不同配穴對SGU大鼠血清及胃組織氧化因子及炎性因子的
影響28
2.1實驗材料28
2.1.1實驗動物及分組28
2.1.2主要儀器與試劑28
2.2實驗方法29
2.2.1TBA法測定血清SOD水平29
2.2.2TBA法測定血清MDA水平29
2.2.3比色法測定血清及胃組織MPO水平29
2.2.4硝酸還原酶法測定血清及胃組織NO水平29
2.2.5比色法測定胃組織GSH-Px水平30
2.2.6ELISA法檢測血清IL-1β #65380;TNF-α和IL-6 #65380;ET-1水平30
2.2.7統(tǒng)計分析30
2.3實驗結(jié)果30
2.3.1各組大鼠胃組織中氧化-抗氧化因子的水平30
2.3.2各組大鼠血清中氧化-抗氧化因子的水平31
2.3.3各組大鼠血清中炎癥細胞因子的含量31
2.4小結(jié)32
2.5討論33
2.5.1氧化-抗氧化因子系統(tǒng)對黏膜組織的影響33
2.5.2炎癥細胞因子對黏膜組織的影響35
2.5.3針刺對氧化應激的影響研究概況及發(fā)展趨勢35
3預針刺不同配穴對SGU大鼠胃組織TLRs信號通路的影響38
3.1實驗材料38
3.1.1實驗動物及分組38
3.1.2主要儀器與試劑38
3.2實驗方法40
3.2.1干預方法40
3.2.2造模方法40
3.2.3免疫組化染色法觀察胃組織TLR4 #65380;MyD88 #65380;TRIF蛋白
表達情況40
3.2.4Westen
lot法檢測胃組織中TLR4 #65380;MyD88 #65380;IκB-α
蛋白的表達41
3.2.5統(tǒng)計分析41
3.3實驗結(jié)果42
3.3.1各組大鼠胃組織的TLR4 #65380;MyD88 #65380;TRIF免疫組化結(jié)果42
3.3.2各組大鼠胃組織的TLR4 #65380;MyD88 #65380;IκB-α蛋白免疫印跡結(jié)果43
3.4小結(jié)44
3.5討論45
3.5.1TLRs信號通路對黏膜組織的影響45
3.5.2針刺對TLRs信號通路的影響46
3.5.3炎癥 #65380;氧化應激與TLRs信號通路的關(guān)系49
3.5.4TLRs信號通路對“氧化-抗氧化”平衡的影響49
3.5.5不同配穴針刺治療胃潰瘍機制的研究進展54
3.5.6預針刺對保護黏膜組織的“調(diào)衡防控”分子機制59
3.5.7不同配穴組方與功效的探討60
第2部分預針刺不同配穴對SGU大鼠大腸組織TLRs信號通路mRNA的影響
4預針刺不同配穴對SGU大鼠大腸組織TLRs信號通路mRNA的影響64
4.1實驗材料64
4.1.1實驗動物及分組64
4.1.2主要儀器及試劑64
4.2實驗方法65
4.2.1干預方法65
4.2.2造模方法65
4.2.3樣本采集與大腸組織RNA提取65
4.2.4總RNA質(zhì)量檢測66
4.2.5分析純化mRNA及片段化66
4.2.6合成 鏈cDNA66
4.2.7合成第二鏈cDNA66
4.2.8雙鏈cDNA末端修復反應66
4.2.93′末端加“A”反應67
4.2.10連接測序接頭67
4.2.11文庫片段篩選67
4.2.12PCR擴增DNA文庫67
4.2.13文庫的質(zhì)量檢測67
4.2.14上機測序68
4.3實驗過程68
4.3.1采用FastQC測序數(shù)據(jù),對原始數(shù)據(jù)質(zhì)量評估68
4.3.2采用Timgaloe測序數(shù)據(jù)質(zhì)量控制68
4.3.3采用HISAT2參考基因組比對68
4.3.4采用Rseqc對轉(zhuǎn)錄組整體質(zhì)量評估68
4.3.5采用StingTie進行基因表達定量69
4.3.6采用deseq2進行差異基因鑒定69
4.4實驗結(jié)果70
4.4.1mRNA質(zhì)量質(zhì)控結(jié)果70
4.4.2mRNA數(shù)據(jù)質(zhì)控結(jié)果71
4.4.3各組mRNA差異表達比較72
4.4.4各組樣品TLRs信號通路差異基因的GO富集比較73
4.4.5各組樣品TLRs信號通路差異基因的KEGG富集分析74
4.5小結(jié)75
4.6討論76
4.6.1胃和大腸在消化系統(tǒng)胚胎發(fā)育上是同源的76
4.6.2胃和大腸在中醫(yī)臟腑關(guān)系中聯(lián)系緊密76
4.6.3合募配穴組與俞募配穴組對應激性胃潰瘍大鼠黏膜的保護的共同基因77
4.6.4合募配穴組對應激性胃潰瘍大鼠黏膜的保護作用的基因77
4.6.5俞募配穴組對應激性胃潰瘍大鼠黏膜的保護作用的基因77
第3部分預針刺與奧美拉唑?qū)GU模型大鼠胃組織保護作用研究
5預針刺合募配穴預防應激性胃潰瘍模型大鼠胃組織保護作用的機制研究82
5.1實驗材料82
5.1.1實驗動物及分組82
5.1.2主要儀器及試劑82
5.2實驗方法83
5.2.1大鼠SGU模型的建立83
5.2.2干預方法83
5.2.3檢測指標及方法84
5.2.4統(tǒng)計分析85
5.3實驗結(jié)果85
5.3.1各組大鼠胃組織肉眼形態(tài)比較85
5.3.2各組大鼠胃黏膜組織形態(tài)學比較85
5.3.3各組大鼠血清中MDA #65380;MPO #65380;GSH-Px水平比較87
5.3.4各組大鼠胃組織中MDA #65380;MPO #65380;GSH-Px水平比較88
5.3.5各組大鼠血清中炎性因子含量比較89
5.3.6各組大鼠胃組織中TLR4 #65380;MyD88 #65380;IκB-α蛋白表達比較89
5.4小結(jié)90
5.5討論90
6預針刺俞募配穴對應激性胃潰瘍模型大鼠胃組織保護作用的機制研究92
6.1實驗材料92
6.1.1實驗動物92
6.1.2動物分組及處理92
6.2實驗方法93
6.2.1束縛-水浸法應激性胃潰瘍模型制備93
6.2.2樣本采集與胃潰瘍指數(shù)測定93
6.2.3血清細胞因子測定94
6.2.4組織細胞因子測定94
6.2.5ELISA實驗評估94
6.2.6組織學觀察94
6.2.7免疫印跡實驗95
6.2.8統(tǒng)計分析95
6.3實驗結(jié)果95
6.3.1俞募配穴對大鼠模型胃黏膜肉眼觀及潰瘍指數(shù)變化95
6.3.2俞募配穴降低胃的UI指數(shù)情況96
6.3.3俞募配穴對模型大鼠組織形態(tài)學的影響96
6.3.4俞募配穴降低血清和胃組織中過氧化物的水平97
6.3.5俞募配穴可降低血清炎癥因子的表達99
6.3.6俞募配穴對TLR4 #65380;MyD88和NF-κBp65蛋白表達的抑制作用99
6.4小結(jié)100
6.5討論100
6.5.1研究結(jié)果100
6.5.2預針刺俞募配穴對胃黏膜的“調(diào)衡防控”機制102
第4部分腹部推拿對應激性胃潰瘍的保護作用研究
7腹部推拿對應激性胃潰瘍的保護作用研究106
7.1實驗材料106
7.1.1實驗動物及分組106
7.1.2主要儀器及試劑106
7.2實驗方法106
7.2.1實驗動物分組及干預方法106
7.2.2造模方法107
7.2.3統(tǒng)計分析107
7.3實驗結(jié)果107
7.3.1腹部推拿對預防SGU各組大鼠胃組織損傷有作用107
7.3.2腹部推拿預防SGU胃組織損傷可能通過調(diào)節(jié)“氧化-
抗氧化”平衡108
7.4討論111
7.4.1“經(jīng)絡聯(lián)系至心腦”是腹部推拿起到“調(diào)神”作用的
前提111
7.4.2“調(diào)理臟腑”是腹部推拿起到“調(diào)神”的基礎(chǔ)112
7.4.3腹部推拿可通過“暢通氣機”而達到“調(diào)神”的目的112
參考文獻
附錄