生物化學實驗指導

第一章 實驗基本技術

第二章 蛋白質(zhì)
實驗一 蛋白質(zhì)分離
實驗（一）凝膠層析分離牛血清白蛋白與溶茵酶
實驗（二）薄層層析分離不同種類的氨基酸
實驗（三）聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白質(zhì)
實驗（四）二維蛋白質(zhì)電泳
實驗（五）乙酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白
實驗二 蛋白質(zhì)的性質(zhì)（呈色反應）
買驗（一）雙縮脲法顯色反應
買驗（二）茚三酮顯色反應
實驗（三）黃色顯色反應
實驗三 蛋白質(zhì)的性質(zhì)（沉淀反應）
買驗（一）鹽析沉淀法
實驗（二）乙醇沉淀法
買驗（三）重金屬鹽沉淀法
買驗（四）有機酸沉淀法
買驗（五）加熱使蛋白質(zhì)變性沉淀
實驗四 蛋白質(zhì)的性質(zhì)（兩性解離和等電點）
買驗（一）酪蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)
實驗（二）酪蛋白等電點的測定
實驗（三）聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳法測定蛋白質(zhì)等電點
實驗（四）牛乳中酪蛋白的制備
實驗五 蛋白質(zhì)含量測定和純度鑒定
買驗（一）凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)的含量
實驗（二）雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量
實驗（三）紫外吸收法測定蛋白質(zhì)的含量
實驗（四）考馬斯亮藍G—250法測定蛋白質(zhì)的含量
實驗（五）Folin—酚試劑（Lowry法）測定蛋白質(zhì)含量
實驗（六）BCA法測定蛋白質(zhì)含量
實驗（七）SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳測酶相對分子量及純度鑒定
實驗（八）固定化蛋白質(zhì)的免疫生化鑒定（Western印跡）

第三章 核酸
實驗一 核酸的分離
實驗（一）離子交換柱層析分離核苷酸
實驗（二）植物DNA的提取
實驗（三）入噬菌體DNA提取
實驗（四）鼠肝DNA的制備
實驗（五）CTAB法小量制備大腸桿菌基因組DNA
實驗（六）組織和細胞的RNA的制備
實驗二 核酸組分鑒定
實驗（一）肝組織中核酸的提取和核酸組分的鑒定
實驗（二）酵母核糖核酸（RNA）的提取及組分鑒定
實驗三 核酸濃度測定
實驗（一）定磷法測定核酸的含量
實驗（二）紫外吸收法測定核酸的含量
實驗（三）化學法測定DNA的含量——二苯胺顯色法
實驗（四）地衣酚顯色法測定RNA含量

第四章 維生素
實驗一 維生素的提取
實驗（一）總維生素C的提取與定量（2，4-二硝基苯肼法）
實驗（二）胡蘿卜素的柱層析分離法
實驗二 維生素的含量測定
實驗（一）2，6—二氯酚靛酚滴定法測定還原性維生素C的含量
實驗（二）磷鉬酸法測定維生素C的含量
實驗（三）碘量法測定維生素C的含量

第五章 酶
實驗一 酶的特點
實驗（一）淀粉酶和蔗糖酶作用的特異性
實驗（二）過氧化氫酶的高效性
實驗二 酶促反應動力學
實驗（一）溫度對酶活性的影響
實驗（二）pH值對酶活性的影響
實驗（三）激活劑和抑制劑對酶活性的影響
實驗（四）丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制
實驗（五）4一氨基安替比林顯色反應測定堿性磷酸酶Km
實驗（六）磷鉬酸及磷鎢酸顯色反應測定堿性磷酸酶Km
實驗（七）脲酶Km值的簡易測定法
實驗三 酶的制備和活力
實驗（一）枯草桿菌堿性磷酸酶的制備及酶活力的測定
實驗（二）3一磷酸甘油醛脫氫酶偶聯(lián)法測定血清醛縮酶活性
實驗（三）酯酶的分離、純化與活性測定
實驗（四）瓊脂糖凝膠電泳法分離乳酸脫氫酶同工酶
實驗（五）大蒜細胞SOD的提取與分離

第六章 糖類
實驗一 糖及糖原的提取鑒定
實驗（一）堿性溶液法進行肝糖原的提取與鑒定
實驗（二）三氯乙酸法進行肝糖原的提取和鑒定
實驗二 血糖含量測定
實驗（一）鄰甲苯胺法測定血清葡萄糖
實驗（二）蒽酮比色法測定血清中葡萄糖含量
實驗（三）GOD—PAP法測定血清葡萄糖
實驗（四）Folin—Wu法測定血清葡萄糖
實驗三 糖代謝
實驗（一）糖酵解
實驗（二）植物中丙酮酸含量的測定
實驗四 血糖調(diào)節(jié)
實驗（一）腎上腺素和胰島素對家兔血糖濃度的影響
實驗（二）運動對骨骼肌糖代謝的影響

第七章 脂類
實驗一 脂類含量測定
實驗（一）磷酸甘油氧化酶法測定血清甘油三酯
實驗（二）異丙醇抽提、乙酰丙酮顯色法測定血清甘油三酯
實驗（三）Hanus法測定不飽和脂肪酸的碘價
實驗（四）氧化酶法測定血清總膽固醇含量
實驗（五）鄰苯二甲醛直接顯色法測定血清總膽固醇的含量
實驗（六）硫磷鐵法測定血清總膽固醇含量
實驗二 脂類代謝
實驗（一）肝的生酮作用
實驗（二）酮體的生成及鑒定
實驗三 脂類的提取
實驗（一）卵磷脂的提取和定性鑒定
實驗（二）瓊脂糖凝膠電泳分離血清脂蛋白
實驗（三）薄膜層析法分離血清脂類

第八章 氨基酸
實驗一 紙層析法測大鼠肌勻漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的氨基移換作用
實驗二 二硝基苯腙顯色法測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性
實驗三 精氨酸酶在尿素形成中的作用
實驗四 離子交換柱層析法分離氨基酸

第九章 分子生物學基礎實驗
實驗一 細菌質(zhì)粒DNA提取及紫外吸收法測定核酸的含量
實驗二 質(zhì)粒DNA提取（質(zhì)粒小量提取試劑盒）
實驗三 質(zhì)粒DNA的酶切分析
實驗四 質(zhì)粒載體與外源DNA片段的連接
實驗五 CaCl2法制備Ecoli感受態(tài)細胞
實驗六 重組DNA的轉(zhuǎn)化和克隆篩選
實驗七 瓊脂糖凝膠電泳分離DNA
實驗八 利用PCR技術從質(zhì)粒擴增DNA
實驗九 RT—PCR方法
實驗十 熒光定量PCR測定培養(yǎng)He1a細胞中GAPDH含量
實驗十一 Southernb1ot實驗方法
實驗十二 Northernb1ot實驗方法
實驗十三 真核細胞DNA的制備與定量
實驗十四 表達蛋白的分離與純化
實驗十五 表達蛋白的生物學活性檢測
實驗十六 放射性同位素標記的DNA序列測定分析
實驗十七 細胞凋亡的分子生物學檢測方法
實驗十八 測序技術
實驗（一）非同位素銀染測序系統(tǒng)操作技術
實驗（二）T7DNA聚合酶測序技術
實驗十九 分子雜交技術
實驗（一）雙鏈DNA探針及其標記方法之切口平移法
實驗（二）雙鏈DNA探針及其標記方法之隨機引物合成法
實驗（三）單鏈DNA探針及其標記方法
實驗（四）末端標記DNA探針
實驗（五）寡核苷酸探針
實驗（六）菌落原位雜交
實驗（七）斑點雜交

第十章 大實驗和綜合實驗
實驗一 溶菌酶的提取和系列性質(zhì)測定
實驗（一）實驗準備
實驗（二）酶的提取
實驗（三）酶的純化
實驗（四）酶活力、蛋白濃度測定
實驗（五）酶促動力學（Km測定、酶的抑制）
實驗（六）SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳測酶相對分子量及純度鑒定
實驗二 酸性磷酸酯酶的提取分離、活性測定
實驗（一）酸性磷酸酯酶的提取分離純化
實驗（二）酶促反應進程曲線的制作
實驗（三）酸性磷酸酯酶的酶活力測定
實驗（四）凝膠層析法純化酸性磷酸酯酶
實驗（五）考馬斯（Comessie）亮藍結合法測定蛋白質(zhì)濃度
實驗（六）酸性磷酸酯酶米氏常數(shù)的測定
實驗（七）酸性磷酸酯酶的檢測——SDS—PAGE電泳法
實驗三 動物和植物組織DNA的提取和鑒定
實驗四 細胞色素C的制備和測定
實驗五 血清中IgG的分離純化
實驗六 紅細胞中SOD分離純化及活性鑒定
實驗七 燕麥水解蛋白的制備和理化性質(zhì)測定
參考文獻

附錄
附錄1 常用緩沖溶液的配制
附錄2 常用酸堿摩爾溶液的配制
附錄3 常用酸堿指示劑的配制
附錄4 常用抗凝試劑的配制
附錄5 硫酸銨飽和度計算表
附錄6 色譜法常用數(shù)據(jù)
附錄7 實驗數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)處理