石榴皮多酚抑菌活性研究及應(yīng)用

第1章 概述 1
1.1 石榴資源概況 1
1.2 石榴皮的生物活性成分 2
1.3 石榴皮多酚的生物活性作用 4
1.3.1 抗氧化作用 4
1.3.2 抑菌作用 5
1.3.3 抗病毒作用 6
1.3.4 心血管保護(hù)作用 6
1.3.5 抗炎作用 7
1.3.6 抗腫瘤作用 7
1.4 石榴皮多酚的提取方法 8
1.4.1 溶劑萃取法 8
1.4.2 超聲波輔助提取法 8
1.4.3 微波輔助提取法 9
1.4.4 超臨界流體萃取法 10
1.5 石榴皮多酚的安全性 10
參考文獻(xiàn) 11
第2章 石榴皮多酚的提取、純化及抑菌活性初探 16
2.1 引言 16
2.2 材料與方法 18
2.2.1 試劑與儀器 18
2.2.2 石榴皮單寧的提取 20
2.2.3 石榴皮單寧的純化 20
2.2.4 高效液相色譜分析 21
2.2.5 抑菌效果研究 22
2.3 結(jié)果與分析 23
2.3.1 液相色譜檢測(cè)石榴皮提取物的成分及含量 23
2.3.2 抑菌效果評(píng)價(jià) 25
2.4 小結(jié) 27
參考文獻(xiàn) 28
第3章 安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌細(xì)胞膜完整性及細(xì)胞形態(tài)的影響 31
3.1 引言 31
3.2 材料與方法 32
3.2.1 試劑與儀器 32
3.2.2 最小抑菌濃度的測(cè)定 35
3.2.3 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 36
3.2.4 膜電位的測(cè)定 37
3.2.5 鉀離子流出的測(cè)定 37
3.2.6 掃描電子顯微鏡觀察 38
3.2.7 透射電子顯微鏡觀察 38
3.3 結(jié)果與分析 40
3.3.1 最小抑菌濃度 40
3.3.2 安石榴苷對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響 40
3.3.3 安石榴苷對(duì)膜電位的影響 41
3.3.4 安石榴苷對(duì)鉀離子流出的影響 42
3.3.5 掃描電子顯微鏡圖譜 43
3.3.6 透射電子顯微鏡圖譜 44
3.4 小結(jié) 45
參考文獻(xiàn) 47
第4章 安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌毒力因子表達(dá)的影響 51
4.1 引言 51
4.2 材料與方法 54
4.2.1 試劑與儀器 54
4.2.2 菌種活化及菌懸液制備 56
4.2.3 菌落計(jì)數(shù) 56
4.2.4 溶血活性的測(cè)定 57
4.2.5 凝固酶效價(jià)的測(cè)定 58
4.2.6 總腸毒素的檢測(cè) 58
4.2.7 qRT-PCR  59
4.3 結(jié)果與分析 63
4.3.1 安石榴苷對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響 63
4.3.2 安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌溶血活性的影響 64
4.3.3 安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌凝固酶表達(dá)的影響 65
4.3.4 安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌總腸毒素表達(dá)的影響 65
4.3.5 安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌毒力基因表達(dá)的影響 66
4.4 小結(jié) 71
參考文獻(xiàn) 72
第5章 亞致死濃度下安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌生物膜形成的影響 75
5.1 引言 75
5.2 材料與方法 80
5.2.1 試劑與儀器 80
5.2.2 菌種活化及菌懸液制備 83
5.2.3 亞抑菌濃度下生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 83
5.2.4 結(jié)晶紫染色法檢測(cè)安石榴苷對(duì)生物膜形成的影響 84
5.2.5 MTT染色法檢測(cè)安石榴苷對(duì)生物膜代謝的影響 85
5.2.6 生物膜中活菌的計(jì)數(shù) 85
5.2.7 掃描電鏡觀察生物膜的形態(tài) 85
5.2.8 激光共聚焦顯微鏡觀察生物膜的形態(tài) 86
5.2.9 細(xì)菌表面疏水率測(cè)定 87
5.2.10 qRT-PCR  87
5.3 結(jié)果與分析 91
5.3.1 亞抑菌濃度的安石榴苷對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響 91
5.3.2 結(jié)晶紫染色法反映的抗生物膜效果 92
5.3.3 MTT染色法顯示的抗生物膜效果 94
5.3.4 生物膜中活菌的數(shù)量 94
5.3.5 掃描電鏡觀察安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌生物膜的影響 96
5.3.6 激光共聚焦顯微鏡觀察安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌生物膜的影響 97
5.3.7 安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌表面疏水率的影響 98
5.3.8 安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌生物膜相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平的影響 99
5.4 小結(jié) 102
參考文獻(xiàn) 104
第6章 亞致死濃度下安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌蛋白組表達(dá)的影響 108
6.1 引言 108
6.2 材料與方法 114
6.2.1 試劑與儀器 114
6.2.2 蛋白質(zhì)的提取與定量 116
6.2.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳 118
6.2.4 蛋白質(zhì)的消化 118
6.2.5 多肽的脫鹽純化與定量 119
6.2.6 多肽的標(biāo)記 119
6.2.7 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析 122
6.2.8 蛋白質(zhì)鑒定及數(shù)據(jù)庫查詢 123
6.2.9 生物信息學(xué)分析 124
6.3 結(jié)果與分析 125
6.3.1 安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)的抑制作用 125
6.3.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳圖譜分析 126
6.3.3 蛋白質(zhì)定量與聚類分析 127
6.3.4 蛋白質(zhì)的細(xì)胞定位 128
6.3.5 表達(dá)量顯著降低的蛋白 128
6.3.6 表達(dá)量顯著增加的蛋白 137
6.3.7 安石榴苷對(duì)金黃色葡萄球菌代謝通路的影響 140
6.3.8 蛋白相互作用分析 146
6.4 小結(jié) 148
參考文獻(xiàn) 154
第7章 石榴皮多酚的應(yīng)用 157
7.1 在食品防腐保鮮領(lǐng)域的應(yīng)用 157
7.2 在其他領(lǐng)域的應(yīng)用 159
參考文獻(xiàn) 161