細胞培養(yǎng)與細胞水平篩選（楊華軍）

學習情境一  接受任務(wù)，任務(wù)前信息收集     001
情境描述 001
學習目標 001
任務(wù)書 001
任務(wù)分組 002
工作計劃 002
任務(wù)實施 003
評價反饋 004
相關(guān)知識  005
一、EGFR背景知識 005
1．藥物靶點 005
2．EGFR簡介 005
3．EGFR抑制劑 006
二、實驗方案討論結(jié)果案例 009
學習情境二  實驗設(shè)施和實驗設(shè)備     010
情境描述 010
學習目標 010
任務(wù)書 010
任務(wù)分組 010
工作計劃 011
任務(wù)實施 012
評價反饋 014
相關(guān)知識  015
一、細胞培養(yǎng)實驗室生物安全 015
二、細胞培養(yǎng)實驗室的設(shè)備 015
1．超凈工作臺、生物安全柜 016
2．細胞培養(yǎng)箱 017
3．恒溫水浴鍋 018
4．臺式離心機 018
5．冰箱和冰柜 019
6．細胞計數(shù)器 020
7．倒置顯微鏡 020
8．液氮罐 020
9．高壓滅菌鍋 020
三、試劑和耗材 021
1．細胞培養(yǎng)容器 021
2．吸管和移液器 022
3．離心管和細胞凍存管 023
4．細胞消化液 024
5．基礎(chǔ)培養(yǎng)基 024
6．血清 025
7．抗生素 025
四、無菌技術(shù) 026
1．無菌工作區(qū)域 026
2．良好的個人衛(wèi)生 026
3．無菌試劑和培養(yǎng)基 026
4．無菌操作 026
學習情境三  細胞的復蘇與凍存     028
情境描述 028
學習目標 028
任務(wù)書 028
任務(wù)分組 028
工作計劃 029
任務(wù)實施 030
評價反饋 032
相關(guān)知識  033
一、液氮罐的使用 033
1．液氮的來源 033
2．液氮的特性 033
3．液氮使用注意事項   034
二、NCI-H1975細胞的復蘇 034
1．NCI-H1975細胞的相關(guān)信息 034
2．美國模式培養(yǎng)物集存庫 035
3．復蘇NCI-H1975細胞的實驗設(shè)備、試劑和耗材 035
4．復蘇NCI-H1975細胞的實驗流程 035
5．凍存NCI-H1975細胞的實驗設(shè)備、試劑和耗材 037
6．凍存NCI-H1975細胞的實驗流程 037
學習情境四  細胞的傳代培養(yǎng)與觀察     038
情境描述 038
學習目標 038
任務(wù)書 038
任務(wù)分組 038
工作計劃 039
任務(wù)實施 041
評價反饋 043
相關(guān)知識  044
一、細胞的常規(guī)觀察 044
1．細胞形態(tài) 044
2．細胞生長 045
3．營養(yǎng)液 046
4．生物污染 046
二、NCI-H1975細胞的傳代培養(yǎng) 049
1．傳代時間的確定 049
2．NCI-H1975細胞傳代所需的實驗設(shè)備、試劑和耗材 049
3．NCI-H1975細胞傳代實驗流程 049
4．懸浮細胞的傳代 050
三、細胞數(shù)目和細胞存活率的測定 050
1．血球計數(shù)板的基本構(gòu)造 050
2．使用血球計數(shù)板進行細胞數(shù)目和存活率的測定 051
學習情境五  細胞鋪板及鋪板密度的確定     052
情境描述 052
學習目標 052
任務(wù)書 052
任務(wù)分組 052
工作計劃 053
任務(wù)實施 054
評價反饋 055
相關(guān)知識  056
一、細胞鋪板 056
二、細胞梯度稀釋觀察法 058
三、細胞梯度稀釋生長曲線法 059
學習情境六  細胞鋪板和藥物處理     061
情境描述 061
學習目標 061
任務(wù)書 061
任務(wù)分組 061
工作計劃 062
任務(wù)實施 063
評價反饋 064
相關(guān)知識  066
一、細胞鋪板 066
二、藥物處理 066
1．藥物儲存液的配制 066
2．測試藥物的梯度稀釋 067
3．藥物處理 068
學習情境七  實驗結(jié)果的檢測     069
情境描述 069
學習目標 069
任務(wù)書 069
任務(wù)分組 069
工作計劃 070
任務(wù)實施 071
評價反饋 073
相關(guān)知識  074
一、實驗結(jié)果的檢測 074
1．CellTiter-Glo?細胞活力檢測法 074
2．MTT法 075
3．CCK-8法 076
二、多功能酶標儀的使用 078
學習情境八  實驗數(shù)據(jù)的處理和呈現(xiàn)     079
情境描述 079
學習目標 079
任務(wù)書 079
任務(wù)分組 079
工作計劃 080
任務(wù)實施 081
評價反饋 083
相關(guān)知識  084
一、測試藥物對細胞活性抑制率的計算 084
二、GraphPad Prism繪制量效曲線并計算IC50值 085
三、絕對IC50和相對IC50 090
四、實驗結(jié)果呈現(xiàn) 091
參考文獻     092