口蹄疫及其轉基因植物疫苗

目錄
前言
上篇 概述 1
1 口蹄疫病毒基因組基本結構及其分子生物學特征 2
1.1 口蹄疫概述 2
1.2 口蹄疫流行概況 3
1.3 口蹄疫病毒分類及結構 6
1.4 口蹄疫病毒基因組基本結構 8
1.5 口蹄疫病毒結構蛋白主要功能 9
1.6 口蹄疫病毒非結構蛋白主要功能 10
1.7 阿克蘇（Akesu/O/58）口蹄疫病毒基因組結構及特點 11
參考文獻 12
2 口蹄疫疫苗研究進展 17
2.1 口蹄疫傳統疫苗 17
2.1.1 FMD弱毒疫苗 18
2.1.2 FMD滅活疫苗 18
2.2 口蹄疫新型疫苗 19
2.2.1 FMD基因工程亞單位疫苗 20
2.2.2 FMD合成肽疫苗 22
2.2.3 FMD融合蛋白疫苗 23
2.2.4 FMD核酸疫苗 24
2.2.5 FMD重組活載體疫苗 26
2.2.6 FMD基因缺失疫苗 27
2.2.7 FMD反向遺傳疫苗 27
2.3 免疫效果和水平監(jiān)測 28
參考文獻 29
3 植物反應器生產醫(yī)用蛋白的研究進展 34
3.1 轉基因植物生產疫苗的基本流程和表達系統 34
3.2 轉基因植物疫苗的研究概況 35
3.3 轉基因植物疫苗的臨床應用 36
3.4 轉基因植物抗體的研究概況 37
3.5 轉基因植物抗體的臨床應用 38
3.6 轉基因植物藥用蛋白的研究概況 39
3.7 生物安全性評價 39
3.7.1 對健康的影響 40
3.7.2 對環(huán)境和生態(tài)的影響 40
3.7.3 轉基因植物的檢測 41
參考文獻 42
4 口蹄疫轉基因植物疫苗的研究 47
4.1 國外研究概況 47
4.2 國內研究概況 48
4.2.1 口蹄疫病毒結構基因P1在馬鈴薯中的轉化與表達 48
4.2.2 口蹄疫病毒結構基因P1在玉米中的轉化與表達 50
4.2.3 口蹄疫病毒結構基因P1在水稻中的轉化與表達 51
4.2.4 口蹄疫病毒結構基因VP1在熱帶牧草柱花草中的轉化與表達 52
4.2.5 口蹄疫病毒結構基因在豆科植物中的轉化與表達 54
參考文獻 58
下篇 實驗操作 61
5 阿克蘇（Akesu/O/58）FMDV結構基因VP1和P1的克隆與核苷酸序列分析 62
5.1 目的 62
5.2 基本原理與技術路線 62
5.3 材料與方法 62
5.3.1 材料 62
5.3.2 方法 63
5.4 結果 67
5.4.1 目的基因的獲得 67
5.4.2 目的基因的克隆與鑒定 68
5.4.3 目的基因的核苷酸和氨基酸序列 69
5.5 討論 69
5.6 結論 71
參考文獻 71
6 植物雙元表達載體的構建 73
6.1 目的 73
6.2 基本原理與技術路線 73
6.3 材料與方法 73
6.3.1 材料 73
6.3.2 方法 74
6.4 結果 80
6.4.1 目的基因的擴增 80
6.4.2 中間表達載體的鑒定 80
6.4.3 目的基因核苷酸序列測定與分析 81
6.4.4 植物雙元表達載體的構建和鑒定 82
6.5 討論 82
6.6 結論 84
參考文獻 84
7 根癌農桿菌介導的阿克蘇（Akesu/O/58）FMD結構基因VP1在煙草中的轉化與表達 85
7.1 目的 85
7.2 技術路線 85
7.3 材料與方法 85
7.3.1 材料 85
7.3.2 方法 86
7.4 結果 91
7.4.1 轉化植株的抗性篩選和抗性植株的獲得 91
7.4.2 目的基因和選擇性報告基因的PCR檢測 92
7.4.3 目的基因和選擇性報告基因的轉錄水平檢測 93
7.4.4 目的基因的DNA點雜交和PCR-Southern印跡 95
7.4.5 目的基因的表達 95
7.5 討論 96
7.6 結論 98
參考文獻 99
8 阿克蘇（Akesu/O/58）FMDV VP1基因在兩種豆科牧草中的轉化與轉基因植株的獲得 101
8.1 目的 101
8.2 基本原理與技術路線 101
8.3 材料與方法 101
8.3.1 材料 101
8.3.2 方法 102
8.4 結果 104
8.4.1 組織培養(yǎng)觀察 104
8.4.2 雙元表達載體的鑒定 105
8.4.3 轉化植株的篩選和抗性植株的獲得 105
8.4.4 目的基因和選擇性報告基因的PCR檢測 107
8.4.5 目的基因和選擇性報告基因的轉錄水平檢測 108
8.4.6 目的基因DNA點雜交和PCR-Southern印跡 109
8.4.7 目的蛋白的Western Blot檢測 110
8.5 討論 111
8.6 結論 112
參考文獻 112
9 FMDV VP1 轉基因煙草對 Balb/C小鼠免疫效果的研究 114
9.1 目的 114
9.2 技術路線 114
9.3 材料與方法 114
9.3.1 材料 114
9.3.2 方法 115
9.4 結果 116
9.4.1 血清抗體的檢測 116
9.4.2 病毒的乳鼠半數致死量 117
9.4.3 病毒血癥試驗 117
9.4.4 攻毒保護率 117
9.5 討論 118
9.6 結論 120
參考文獻 121
10 口蹄疫轉基因植物疫苗研究總結與展望 123
10.1 口蹄疫轉基因植物疫苗研究總結 123
10.1.1 目的基因的選擇 123
10.1.2 轉化受體植物的選擇 125
10.1.3 轉基因方法的選擇 126
10.1.4 口蹄疫轉基因植物疫苗免疫效果 127
10.2 展望 128
10.2.1 獲得高效穩(wěn)定表達的轉化植株 128
10.2.2 提高外源基因轉化率與檢測靈敏度 129
10.2.3 提高轉基因植物疫苗的免疫效果 130
參考文獻 131
符號或縮略語說明 134
附錄 136