乳酸菌誘導結(jié)腸癌細胞凋亡機制研究

第一章結(jié)腸癌及乳酸菌功能關(guān)系概述

第一節(jié)引言

一、結(jié)腸癌簡介

二、結(jié)腸癌發(fā)病癥狀

三、乳酸菌抑制結(jié)腸癌的可能途徑

第二節(jié)人結(jié)腸癌的發(fā)病原因

一、結(jié)腸癌發(fā)病原因簡述

二、環(huán)境化學物質(zhì)誘發(fā)的結(jié)腸癌

三、飲食因素誘發(fā)的結(jié)腸癌

四、細菌酶誘發(fā)的結(jié)腸癌

第三節(jié)乳酸菌調(diào)控機體免疫功能

一、乳酸菌對非特異性免疫功能的影響

二、乳酸菌對特異性免疫功能的影響

三、乳酸菌激活機體的抗腫瘤免疫

第二章乳酸菌抗結(jié)腸癌功能研究進展

第一節(jié)乳酸菌抗結(jié)腸癌作用的機理

一、乳酸菌降低食源性致癌物質(zhì)的毒性

二、乳酸菌抑制癌細胞生長及誘導癌細胞凋亡

三、乳酸菌對潛在致癌物質(zhì)致癌作用的阻斷

四、乳酸菌對飲食誘發(fā)結(jié)腸癌作用的阻斷

第二節(jié)乳酸菌不同菌體成分抗結(jié)腸癌作用機理

一、乳酸菌的菌體細胞抗結(jié)腸癌作用研究

二、乳酸菌的菌體細胞壁抗結(jié)腸癌作用研究

三、乳酸菌的菌體細胞質(zhì)抗結(jié)腸癌作用研究

四、乳酸菌的菌體代謝產(chǎn)物抗結(jié)腸癌作用研究

第三節(jié)乳酸菌與線粒體凋亡信號途徑

一、活性氧族

二、線粒體凋亡途徑

第四節(jié)國內(nèi)開展的課題相關(guān)研究

第三章乳酸菌抗腫瘤研究技術(shù)方法

第一節(jié)乳酸菌抗腫瘤研究設(shè)施、材料

一、實驗儀器與設(shè)備

二、實驗所用試劑與藥品

三、實驗所用菌株與細胞

四、實驗用培養(yǎng)液

第二節(jié)乳酸菌抗腫瘤研究檢測方法

一、對結(jié)腸癌細胞增殖抑制能力的測定

二、乳酸菌對人腸道上皮細胞黏附性能的測定

三、乳酸菌對酸耐受能力的測定

四、乳酸菌對膽鹽耐受能力的測定

五、乳酸菌16S rDNA 的鑒定

六、蛋白濃度的測定

七、乳酸菌肽聚糖分子量的檢測

八、乳酸菌肽聚糖氨基酸組成分析

九、乳酸菌菌體和肽聚糖的形態(tài)學觀察

十、HT-29細胞毒性的測定

十一、HT-29細胞形態(tài)學觀察

十二、HT-29細胞DNA損傷的測定

十三、HT-29細胞凋亡與壞死的測定

十四、HT-29細胞周期的測定

十五、HT-29細胞線粒體膜電位的測定

十六、HT-29細胞ROS的檢測

十七、HT-29細胞線粒體和胞漿中細胞色素C的檢測

十八、HT-29細胞總RNA的提取

十九、體外反轉(zhuǎn)錄合成及RT-PCR反應(yīng)

二十、HT-29細胞總蛋白提取與蛋白含量的測定

二十一、HT-29細胞總蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳

二十二、Western blot分析

第四章乳酸菌抗腫瘤核心技術(shù)研究

一、抗結(jié)腸癌功能乳酸菌菌株的體外篩選

二、抗結(jié)腸癌功能乳酸菌菌體成分的篩選

三、乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞的抑制作用

四、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡途徑的研究

五、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡線粒體途徑研究

六、數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析

第五章抗結(jié)腸癌功能乳酸菌的篩選

第一節(jié)引言

第二節(jié)基于抑制HT-29細胞增殖能力篩選抗結(jié)腸癌
乳酸菌

第三節(jié)基于乳酸菌的益生功能篩選抗結(jié)腸癌功能乳酸菌

一、乳酸菌黏附于腸上皮細胞的能力

二、乳酸菌對模擬胃液的耐受能力

三、乳酸菌對模擬小腸液的耐受能力

第四節(jié)乳酸菌菌種鑒定

第五節(jié)本章小結(jié)

第六章抗結(jié)腸癌功能乳酸菌菌體成分的篩選

第一節(jié)引言

第二節(jié)乳酸菌細胞壁和細胞質(zhì)的提取及蛋白含量測定

一、考馬斯亮藍G-250標準曲線

二、乳酸菌細胞壁和細胞質(zhì)蛋白質(zhì)濃度計算

第三節(jié)基于抑制HT-29細胞增殖能力篩選乳酸菌
菌體成分
一、乳酸菌細胞壁和細胞質(zhì)對HT-29細胞增殖的抑制

二、乳酸菌細胞壁和細胞質(zhì)對HT-29細胞的毒性作用

第四節(jié)基于誘導HT-29細胞DNA損傷篩選乳酸菌
菌體成分

一、單細胞凝膠電泳實驗

二、瓊脂糖凝膠電泳實驗

第五節(jié)基于誘導HT-29細胞凋亡篩選乳酸菌菌體成分

一、乳酸菌細胞壁和細胞質(zhì)誘導HT-29細胞的凋亡

二、乳酸菌細胞壁和細胞質(zhì)對HT-29細胞膜電位的影響

三、乳酸菌細胞壁和細胞質(zhì)對HT-29細胞周期的影響

四、乳酸菌細胞壁和細胞質(zhì)對HT-29細胞形態(tài)學的
影響

第六節(jié)乳酸菌細胞壁對正常細胞毒性影響

第七節(jié)本章小結(jié)

第七章乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞抑制作用

第一節(jié)引言

第二節(jié)乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞增殖的抑制

一、5-氟尿嘧啶對HT-29的毒性作用

二、MTT實驗

三、臺盼藍染色實驗

第三節(jié)乳酸菌肽聚糖理化性質(zhì)分析

一、乳酸菌肽聚糖蛋白含量的測定

二、乳酸菌肽聚糖分子量的測定

三、乳酸菌肽聚糖氨基酸組成及含量

四、掃描電鏡觀察乳酸菌肽聚糖形態(tài)

五、透射電鏡觀察乳酸菌肽聚糖形態(tài)

第四節(jié)乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡

一、HE染色

二、Hoechst熒光染色

三、透射電鏡觀察乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞線
粒體的損傷

四、乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞周期的影響

五、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡

第五節(jié)乳酸菌肽聚糖對正常細胞毒性影響

第六節(jié)本章小結(jié)

第八章肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡途徑研究

第一節(jié)引言

第二節(jié)乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞凋亡相關(guān)基因的
影響

一、HT-29細胞總RNA的提取

二、乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞凋亡相關(guān)基因的影響

三、乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞Cyto-C基因表達的
影響

第三節(jié)乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡機制研究

一、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞線粒體膜電位的
損失

二、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞ROS的堆積

三、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞線粒體Cyto-C的
釋放

四、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡相關(guān)蛋白的
變化

第四節(jié)本章小結(jié)

總結(jié)

展望

參考文獻