醫(yī)學(xué)細(xì)胞分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（第3版）

目錄
第一篇 基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)
第一章 醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)基本實(shí)驗(yàn) 1
第一節(jié) 細(xì)胞的顯微結(jié)構(gòu) 1
實(shí)驗(yàn)一 細(xì)胞的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察 1
實(shí)驗(yàn)二 細(xì)胞的顯微測(cè)量技術(shù) 6
第二節(jié) 細(xì)胞生理活動(dòng) 8
實(shí)驗(yàn)三 胞質(zhì)環(huán)流 8
實(shí)驗(yàn)四 細(xì)胞吞噬 9
實(shí)驗(yàn)五 細(xì)胞活性鑒定 11
實(shí)驗(yàn)六 細(xì)胞融合 12
第三節(jié) 細(xì)胞化學(xué)成分的顯示 14
實(shí)驗(yàn)七 普通細(xì)胞化學(xué) 15
實(shí)驗(yàn)八 核酸細(xì)胞化學(xué) 21
實(shí)驗(yàn)九 酶細(xì)胞化學(xué) 25
實(shí)驗(yàn)十 熒光細(xì)胞化學(xué)與免疫熒光細(xì)胞化學(xué) 28
第四節(jié) 細(xì)胞增殖 34
實(shí)驗(yàn)十一 無(wú)絲分裂 34
實(shí)驗(yàn)十二 有絲分裂 35
實(shí)驗(yàn)十三 減數(shù)分裂 39
實(shí)驗(yàn)十四 X染色質(zhì)標(biāo)本制備與觀察 42
實(shí)驗(yàn)十五 早熟染色體凝集的誘導(dǎo)和觀察 43
第五節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng) 46
實(shí)驗(yàn)十六 原代細(xì)胞培養(yǎng) 47
實(shí)驗(yàn)十七 細(xì)胞傳代培養(yǎng) 49
實(shí)驗(yàn)十八 體外培養(yǎng)細(xì)胞的觀察方法 53
第二章 醫(yī)學(xué)生物化學(xué)基本實(shí)驗(yàn) 59
第一節(jié) 蛋白定量分析實(shí)驗(yàn) 59
實(shí)驗(yàn)一 雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)含量 59
實(shí)驗(yàn)二 Folin-酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量 60
實(shí)驗(yàn)三 考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量 61
實(shí)驗(yàn)四 紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量 62
第二節(jié) 層析分離純化實(shí)驗(yàn) 64
實(shí)驗(yàn)五 血清γ-球蛋白的分離純化與鑒定 64
實(shí)驗(yàn)六 葡聚糖凝膠分離血紅蛋白和DNP-胰糜蛋白酶混合液 67
實(shí)驗(yàn)七 離子交換層析分離混合氨基酸 68
第三節(jié) 電泳分析實(shí)驗(yàn) 69
實(shí)驗(yàn)八 血清蛋白質(zhì)醋酸纖維素薄膜電泳 69
實(shí)驗(yàn)九 血漿脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳 71
實(shí)驗(yàn)十 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清LDH同工酶 72
實(shí)驗(yàn)十一 SDS-PAGE測(cè)定蛋白質(zhì)分子量 75
實(shí)驗(yàn)十二 等電聚焦法測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn) 77
第四節(jié) 酶學(xué)實(shí)驗(yàn) 79
實(shí)驗(yàn)十三 pH對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 79
實(shí)驗(yàn)十四 溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 82
實(shí)驗(yàn)十五 底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 83
實(shí)驗(yàn)十六 抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 85
實(shí)驗(yàn)十七 酶的提取及比活性測(cè)定 87
第五節(jié) 物質(zhì)代謝實(shí)驗(yàn) 92
實(shí)驗(yàn)十八 胰島素對(duì)血糖含量的影響 92
實(shí)驗(yàn)十九 鄰甲苯胺法測(cè)血糖含量 92
實(shí)驗(yàn)二十 糖酵解中間產(chǎn)物的鑒定 93
實(shí)驗(yàn)二十一 血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的測(cè)定 95
實(shí)驗(yàn)二十二 血清脂類含量分析 97
第三章 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)基本實(shí)驗(yàn) 100
第一節(jié) 基因克隆實(shí)驗(yàn) 100
實(shí)驗(yàn)一 質(zhì)粒DNA的限制性酶切反應(yīng) 101
實(shí)驗(yàn)二 瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定酶切的線性DNA片段 104
實(shí)驗(yàn)三 DNA酶切片段的回收 107
實(shí)驗(yàn)四 DNA片段的體外連接 109
實(shí)驗(yàn)五 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備 111
實(shí)驗(yàn)六 重組DNA的轉(zhuǎn)化及陽(yáng)性克隆的初步篩選 112
實(shí)驗(yàn)七 陽(yáng)性重組子的鑒定 114
實(shí)驗(yàn)八 堿裂解法質(zhì)粒DNA的小量制備 115
實(shí)驗(yàn)九 質(zhì)粒DNA濃度和純度的測(cè)定 117
第二節(jié) 外源基因GFP在原核細(xì)胞中的誘導(dǎo)表達(dá)和純化 117
實(shí)驗(yàn)十 外源基因在大腸桿菌的誘導(dǎo)表達(dá)和提取 118
實(shí)驗(yàn)十一 親和層析法純化重組蛋白 119
實(shí)驗(yàn)十二 SDS-PAGE鑒定重組蛋白質(zhì) 119
第三節(jié) PCR技術(shù) 121
實(shí)驗(yàn)十三 PCR擴(kuò)增目的基因 123
實(shí)驗(yàn)十四 總RNA提取及RT-PCR擴(kuò)增目的基因 124
實(shí)驗(yàn)十五 實(shí)時(shí)定量PCR分析真核基因的表達(dá) 128
第四章 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)基本實(shí)驗(yàn) 130
第一節(jié) 細(xì)胞遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn) 130
實(shí)驗(yàn)一 人類外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng) 130
實(shí)驗(yàn)二 人類外周血淋巴細(xì)胞染色體的制備 131
實(shí)驗(yàn)三 人類染色體G顯帶 133
實(shí)驗(yàn)四 人類G顯帶染色體核型分析 134
實(shí)驗(yàn)五 姐妹染色單體交換（SCE）標(biāo)本的制備與觀察 136
第二節(jié) 分子遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn) 138
實(shí)驗(yàn)六 短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）的多態(tài)性分析 138
實(shí)驗(yàn)七 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)（RFLP）分析 143
實(shí)驗(yàn)八 單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）的檢測(cè) 145
第三節(jié) 人類遺傳性狀分析 148
實(shí)驗(yàn)九 遺傳性狀基因型與表型分析 148
實(shí)驗(yàn)十 遺傳病的家系分析和再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)估計(jì) 151
第二篇 綜合實(shí)驗(yàn)
第五章 細(xì)胞增殖活力分析 153
第一節(jié) 細(xì)胞增殖的定量分析 153
實(shí)驗(yàn)一 細(xì)胞琥珀酸脫氫酶活性檢測(cè)（MTT法） 153
實(shí)驗(yàn)二 細(xì)胞周期的檢測(cè) 154
第二節(jié) 細(xì)胞內(nèi)ATP含量測(cè)定 155
實(shí)驗(yàn)三 人淋巴細(xì)胞ATP活力檢測(cè) 155
第三節(jié) 細(xì)胞增殖的染色分析 156
實(shí)驗(yàn)四 BrdU染色法檢測(cè)細(xì)胞增殖 156
實(shí)驗(yàn)五 Ki-67免疫染色法檢測(cè)細(xì)胞增殖 157
第六章 細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)與檢測(cè) 160
第一節(jié) 細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)與形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察 160
實(shí)驗(yàn)一 培養(yǎng)細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo) 161
實(shí)驗(yàn)二 錐蟲(chóng)藍(lán)染色檢測(cè)凋亡細(xì)胞 162
實(shí)驗(yàn)三 蘇木精-伊紅染色檢測(cè)凋亡細(xì)胞 163
實(shí)驗(yàn)四 Giemsa染色檢測(cè)凋亡細(xì)胞 164
實(shí)驗(yàn)五 吖啶橙熒光染色檢測(cè)凋亡細(xì)胞 165
實(shí)驗(yàn)六 Ho.33342與PI熒光雙染檢測(cè)凋亡細(xì)胞 165
第二節(jié) 凋亡細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)觀察 167
實(shí)驗(yàn)七 透射電鏡觀察凋亡細(xì)胞 167
實(shí)驗(yàn)八 掃描電鏡觀察凋亡細(xì)胞 168
第三節(jié) 凋亡細(xì)胞的定量分析 169
實(shí)驗(yàn)九 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡細(xì)胞 169
第四節(jié) 細(xì)胞凋亡的分子生物學(xué)特征 171
實(shí)驗(yàn)十 凋亡細(xì)胞DNA ladder檢測(cè) 172
實(shí)驗(yàn)十一 Caspase 3酶活性測(cè)定 172
實(shí)驗(yàn)十二 凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平檢測(cè) 173
實(shí)驗(yàn)十三 凋亡相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)檢測(cè) 174
第七章 細(xì)胞自噬與相關(guān)分析 178
第一節(jié) 細(xì)胞自噬的形態(tài)學(xué)分析 178
實(shí)驗(yàn)一 透射電鏡觀察自噬體的形成 179
實(shí)驗(yàn)二 GFP-LC3自噬斑點(diǎn)的熒光顯微鏡檢測(cè) 180
第二節(jié) 自噬標(biāo)志蛋白的表達(dá)分析 181
實(shí)驗(yàn)三 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)自噬標(biāo)志蛋白的變化 181
第八章 真核生物基因表達(dá)調(diào)控分析 183
實(shí)驗(yàn)一 甲基化特異性PCR（MSP）檢測(cè)基因啟動(dòng)子甲基化 183
實(shí)驗(yàn)二 熒光素酶報(bào)告基因瞬時(shí)轉(zhuǎn)染分析啟動(dòng)子活性 186
第九章 四氯化碳致培養(yǎng)肝細(xì)胞損傷的分析 193
第一節(jié) 培養(yǎng)肝細(xì)胞損傷模型的誘導(dǎo)與形態(tài)學(xué)分析 193
實(shí)驗(yàn)一 肝細(xì)胞損傷的誘導(dǎo)及常規(guī)形態(tài)檢查 193
實(shí)驗(yàn)二 損傷細(xì)胞的脂肪變性檢測(cè) 194
第二節(jié) 肝細(xì)胞損傷的定量分析 195
實(shí)驗(yàn)三 CCK法檢測(cè)細(xì)胞存活率 196
第三節(jié) 損傷肝細(xì)胞相關(guān)酶的分析 197
實(shí)驗(yàn)四 肝損傷細(xì)胞乳酸脫氫酶活性檢測(cè) 198
實(shí)驗(yàn)五 肝損傷細(xì)胞谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性檢測(cè) 199
實(shí)驗(yàn)六 肝細(xì)胞中PPAR γ1表達(dá)水平的檢測(cè) 201
第十章 人遺傳性狀基因的分子診斷與應(yīng)用 201
實(shí)驗(yàn)一 Duchenne型肌營(yíng)養(yǎng)不良的基因診斷 201
實(shí)驗(yàn)二 多重RT-PCR檢測(cè)染色體易位 202
實(shí)驗(yàn)三 利用短串聯(lián)重復(fù)序列進(jìn)行親權(quán)鑒定 205
第三篇 創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)一 糖尿病的生化及遺傳檢測(cè)分析實(shí)驗(yàn) 207
實(shí)驗(yàn)二 唐氏綜合征的產(chǎn)前診斷方法 208
實(shí)驗(yàn)三 家族性高膽固醇血癥的診斷方法 208
實(shí)驗(yàn)四 血友病的診斷 210
實(shí)驗(yàn)五 重組人促紅細(xì)胞生成素在細(xì)胞中的表達(dá)、分離和純化 210
實(shí)驗(yàn)六 p53基因與腫瘤相關(guān)性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 211
實(shí)驗(yàn)七 小鼠組織細(xì)胞形態(tài)及功能分析 212
實(shí)驗(yàn)八 小鼠組織特種細(xì)胞的形態(tài)及特征性成分的鑒定 212
附錄
附錄一 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則 213
附錄二 實(shí)驗(yàn)室安全及防護(hù) 213
附錄三 實(shí)驗(yàn)室常用玻璃儀器的洗滌與清潔 214
附錄四 生物繪圖的要求與方法 217
附錄五 生物學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)報(bào)告 218
附錄六 常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理 218