分子生物學實驗技術

第一章 生物大分子制備和分析常用技術
第一節(jié) 概論
一、預處理和細胞的分離
（一）選擇材料及預處理
（二）細胞的分離
二、細胞的破碎及細胞器的分離
第二節(jié) 電泳技術
一、基本原理
二、影響電泳的因素
三、醋酸纖維素薄膜電泳
四、瓊脂糖凝膠電泳
（一）核酸分子大小與瓊脂糖濃度的關系
（二）核酸構型與瓊脂糖凝膠電泳分離的關系
（三）瓊脂糖凝膠電泳基本方法
五、常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳
（一）聚丙烯酰胺凝膠聚合原理及相關特性
（二）聚丙烯酰胺凝膠電泳原理
（三）操作方法
六、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳原理
七、聚丙烯酰胺梯度凝膠電泳
八、聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳
（一）等電聚焦的原理
（二）pH梯度的形成
九、雙向凝膠電泳
十、染色方法
（一）蛋白質染色
（二）核酸染色
第三節(jié) 色譜技術
一、色譜技術的概念
二、色譜法的分類
（一）按兩相所處的狀態(tài)分類
（二）按色譜的分離機制分類
三、常用的色譜方法
（一）凝膠色譜
（二）離子交換色譜
（三）親和色譜
（四）高效液相色譜
（五）毛細管電泳
第四節(jié) 離心技術
一、離心理論
（一）離心分離的原理
（二）相對離心力和離心時間
（三）離心機的分類
二、離心分離的種類
（一）差速離心法
（二）密度梯度離心法
三、離心操作注意事項
第五節(jié) 分光光度技術
一、基本原理——朗伯比爾定律
二、分光光度技術的應用
（一）定量分析
（二）定性分析
第二章 蛋白質、核酸的提取與分離
第一節(jié) 蛋白質的提取、分離純化及定量
一、蛋白質（包括酶）的提取
（一）水溶液提取法
（二）有機溶劑提取法
二、蛋白質的分離純化
（一）根據蛋白質溶解度不同進行分離的方法
（二）利用色譜技術對蛋白質進行分離純化
（三）利用電泳技術對蛋白質進行純化分離
（四）利用超速離心分離制備蛋白質
（五）膜分離技術在蛋白質分離純化中的應用
（六）重組蛋白的分離純化
（七）分離制備蛋白質的一個實例
三、蛋白質的定量
第二節(jié) DNA的提取與分離
一、質粒DNA的提取與分離
（一）質粒提取的一般步驟
（二）質粒DNA的小量制備
（三）質粒DNA的大量制備
二、染色體DNA的提取與分離
（一）從培養(yǎng)細胞中提取DNA
（二）從組織中提取DNA
（三）從大量血樣的白細胞中分離高分子量DNA
（四）從小量血樣的白細胞中分離高分子量DNA
（五）高分子量DNA的小量快速制備
第三節(jié) RNA的提取與分離
一、組織培養(yǎng)細胞胞質RNA的制備
二、胍鹽法制備總RNA
（一）氯化銫純化培養(yǎng)細胞的RNA
（二）氯化銫純化組織中的RNA
（三）一步法從培養(yǎng)細胞或組織中分離RNA
三、細菌RNA的制備
（一）從革蘭陰性菌中分離高質量RNA
（二）革蘭陽性菌RNA的分離
（三）革蘭陰性菌RNA的快速分離
四、poly（A）+RNA的制備
第四節(jié) 核酸的定量測定
一、紫外分光光度法測定DNA和RNA的含量
二、電泳比較法（溴化乙錠熒光法）
三、定磷法測定核酸
四、二苯胺法測定DNA含量
五、地衣酚法測定RNA含量
第三章 PCR技術
第四章 分子雜交與印跡技術
第五章 分子克隆技術
第六章 外源基因轉移技術
第七章 蛋白質表達技術
第一節(jié) 外源基因在原核細胞中的表達
第八章 分子標記技術
第九章 分子改造技術
第十章 測序及人工合成技術
第十一章 基因組學技術
第十二章 蛋白質組學技術
第十三章 生物芯片技術
第十四章 生物信息學技術
附錄
參考文獻