分子生物學基本技能和策略

第一篇 基因工程原理
概論
0?1分子生物學概述
0?2基因工程概述
0?3基因重組技術的應用前景
第1章 分離目的基因和基因載體
1?1目的基因的獲取
1?2基因載體的選擇
第2章 限制性內(nèi)切核酸酶的應用
2?1概念
2?2序列特征
2?3作用方式
2?4同裂酶和同尾酶
2?5影響酶切活性的主要因素
第3章 目的基因和基因載體的體外連接
3?1DNA連接酶
3?2連接方式
第4章 重組DNA轉化宿主細胞
4?1受體細胞的選擇
4?2重組基因的導入方法
4?3轉化細胞的擴增
第5章 重組體陽性克隆的篩選
5?1遺傳檢測法
5?2物理檢測法
5?3菌落雜交篩選法
5?4免疫化學檢測法
5?5DNA-蛋白篩選法
5?6PCR法確定重組體
5?7DNA序列分析
5?8真核宿主細胞的篩選標記
第6章 外源基因表達及表達產(chǎn)物的檢測
6?1宿主細胞
6?2表達載體
6?3表達產(chǎn)物和表達水平
6?4表達產(chǎn)物的檢測
6?5表達蛋白質(zhì)的分離純化
第二篇 常用生化技術原理
第1章 電泳技術
1?1電泳基本原理
1?2影響泳動度的主要因素
1?3常用的電泳方法
第2章 層析技術
2?1概述
2?2層析原理
2?3柱層析法
2?4凝膠過濾層析法
2?5氣相色譜和高效液相色譜
第3章 分光光度技術
3?1光學原理
3?2Lambert-Beer定律
3?3分光光度計的基本構造
3?4紫外可見光分光光度計
3?5熒光分光光度計
3?6酶標儀
第4章 離心分析法
4?1離心機基本原理
4?2離心機的分類
4?3離心機的結構
4?4離心方法
第5章 透析
5?1透析膜(袋)
5?2溶劑
5?3物理條件
第三篇 分子生物學常用技術
第1章 目的基因和基因載體的分離
實驗1 質(zhì)粒DNA的提取
實驗2 真核生物基因組DNA的提取
實驗3 DNA的瓊脂糖凝膠電泳
實驗4 DNA的定量分析
實驗5 PCR基因擴增
實驗6 哺乳動物DNA的純化與鑒定
實驗7 基因組DNA文庫的建立
第2章 酶切與連接
實驗1 限制性內(nèi)切核酸酶的酶切與鑒定
實驗2 載體與目的基因的連接
第3章 重組DNA的轉化與篩選
實驗1 重組質(zhì)粒轉化大腸桿菌及初步篩選
實驗2 核酸探針的制備和標記
實驗3 原位雜交法進行重組質(zhì)粒的篩選
實驗4 Northern雜交
實驗5 真核細胞基因轉染和篩選
實驗6 轉染細胞的篩選
第4章 外源基因在宿主細胞中的表達
實驗1 在大腸桿菌（E.coli）表達蛋白產(chǎn)物
實驗2 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
實驗3 蛋白質(zhì)雜交法檢測表達蛋白
附:常用生物化學實驗技術
實驗1 不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳
實驗2 凝膠過濾法測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量
實驗3 透析實驗
實驗4 雙縮脲反應
實驗5 胰島素及腎上腺素對血糖含量的影響
實驗6 血糖含量測定
實驗7 蛋白質(zhì)定量測定
第四篇 分子生物學實驗室基本操作和數(shù)據(jù)
第1章 分子生物學實驗室常規(guī)儀器設備
1?1實驗室的常規(guī)儀器及設施
1?2離心機室的裝備
1?3分析儀器室的設置
1?4核素實驗室
1?5細胞培養(yǎng)室
1?6暗室
1?7冷室
第2章 實驗室基本操作
2?1玻璃儀器的洗滌
2?2攪拌和振蕩
2?3容量玻璃儀器的使用方法
2?4分光光度計的使用
2?5干燥箱和恒溫箱
2?6電熱恒溫水浴
2?7酸度計
第3章 實驗室常用數(shù)據(jù)
第4章 常用載體圖譜
主要參考文獻